一、蛋白质的纯化方法有那些呢?具体步骤是什么？
蛋白质分离纯化常用方法有：
1、沉淀，
2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析： a.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定PH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。 b.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能时入孔内而径直流出。
5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质其密度与形态各不相同而分开。
二、蛋白纯化新手，求助两个小分子量蛋白怎么分离？
1、透析与超滤透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开.超滤法是利用高压力或离心力,强使水和其他小的溶质分子通过半透膜,而蛋白质留在膜上,可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质.2、凝胶过滤法也称分子排阻层析或分子筛层析,这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一.柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶（Sephadex ged）和琼脂糖凝胶（agarose gel）.大概原理是：把三种分子量不同的物质放到充满凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱。
大分子会以较快的速度首先流出层析柱，而小分子需要花费较长的时间才能流经柱床，从而达到分离不同分子量蛋白质的目的。三、酶纯化倍数计算公式？
纯化倍数计算公式：(每次比活力）/（第一次比活力）其中：比活力＝活力单位数／mg蛋白（氮）=总活力。因此凡用于蛋白质的纯化手段均适用于酶的纯化。
如盐析法、聚乙二醇沉淀法、有机浴剂分级沉淀法、等电点
法、选择性沉淀法、各种柱层析法
（吸附层析、离子交换层析、凝胶过滤）、各种电泳法及亲和层析等。
性质分析
纯化过程尚需选用迅速简便的活力测定方法，以追踪酶的去向。在选用酶的活力测定方法时，分析方法的迅速要比其精确度
更为重要。
如宁可要一个需时5min，准确度
为5%的方法；也不要一个需时30min，准确度为0．5%的方法。在建立活力测定法之后，再根据各单元纯化步骤及活力分布情况用列表形式表达。
四、蛋白质的回收率怎么算？
蛋白质的回收率通常是指在制备过程中从原料中提取出的蛋白质占原始蛋白质总量的百分比，其计算公式为：(提取出的蛋白质质量 / 原始蛋白质质量) × 100%。在实验室中，常用的提取方法包括硫酸盐沉淀、氨基酸盐析、离子交换和亲和层析等。蛋白质的回收率受多种因素的影响，如原料的质量和种类、提取方法的选择和优化、提取时间和条件的控制等。
因此，在实际应用中，需要根据具体的实验条件和实际需求，选择适合的提取方法，并严格控制提取条件，提高蛋白质的回收率。